在实验操作过程中，首先需要制备一种针对目标抗原的第一抗体，这种抗体固定于固相载体上，如微孔板表面。接着，将待测样品加入到这些已包被好第一抗体的孔中，让其中可能存在的目标抗原与之结合。随后，再加入第二种抗体，这种抗体能够识别并结合到目标抗原的不同表位上，形成所谓的“夹心”结构。
为了进一步增强检测效果，通常会使用酶标记的第二抗体或者第三抗体作为探测工具。当底物溶液添加后，如果存在目标抗原，那么由酶催化产生的颜色变化就可以用来判断结果，并且可以通过分光光度计测量其吸光度值来进行定量分析。
此方法具有操作简便、重复性好以及成本相对较低等优点，在临床诊断、药物研发等多个方面发挥着重要作用。然而，在实际应用时也需要注意控制实验条件，比如温度、pH值等因素对反应的影响，以确保获得可靠准确的数据。
